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提问 

蓝白斑筛选问题!!,蓝白斑筛选的分子机制是什么


时间: 2020-10-18 分类: 作业习题  【来自ip: 15.147.159.186 的 匿名网友 咨询】 手机版
 问题补充 蓝白斑筛选问题!!,蓝白斑筛选的分子机制是什么
  网友答案:
匿名网友
匿名网友

1楼
在重组质粒表达的实验中,蓝白班筛选是要检测重组质粒是否表达,而氨苄的加入主要是为了防止培养过程中染菌。知
  对于半乳糖苷酶活性筛选,首先重组质粒所选的质粒与野生型(感受态)不同,上面有道多克隆位点,蛋白标签,和多对操纵子、启动子,其中就包括乳糖操纵子。当培养液中加入IPTG,IPTG可以和乳糖操纵子下游的的阻遏蛋回白结合,使阻遏蛋白从DNA上脱离,激活半乳糖苷酶的表达。因而重组质粒可以利用x-gal而感受态不能。这个是蓝白斑筛选的主要原理。结果中白斑表示重组质粒表达的菌体,蓝斑表示未表达。
  至于氨苄筛选,通常不会利用氨苄抗性进行筛选,因为感受态中是否答有氨苄抗性基因很不确定,无法得到准确的结果。
匿名网友
匿名网友
2楼
在进行蓝白斑筛选的时候,出现了两个奇怪现象:
  一、我的空白载体转的大肠杆菌不但出现了蓝斑而且还有白斑。
  二、连有目的基因的载体转的大肠杆菌出现了好多蓝色小点点,看起来不像是细菌回。
  不知道是什么原因,我的大肠杆菌是做答过氨苄对照测试的,应该没有杂菌的。
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